Akonáhle bunky, v ktorých kultivujeme

bunková továreňsú kontaminované, s väčšinou z nich sa ťažko manipuluje.Ak sú kontaminované bunky cenné a je ťažké ich znova získať, na ich odstránenie možno použiť nasledujúce metódy.

1. Užívajte antibiotiká

Antibiotiká sú účinnejšie pri ničení baktériíbunkové továrne.Kombinované lieky sú účinnejšie ako samotné lieky.Preventívna medikácia je účinnejšia ako medikácia po kontaminácii.Preventívna liečba zvyčajne používa dvojité antibiotikum (penicilín 100 µg/ml plus streptomycín 100 µg/ml).Po kontaminácii musí byť metóda čistenia 5 až 10-krát väčšia ako zvyčajné množstvo.Liek sa má používať 24 až 48 hodín po pridaní a potom sa má nahradiť zvyčajnou rutinou.Kultivačná tekutina.Táto metóda môže byť účinná v počiatočných štádiách kontaminácie.Okrem penicilínu a streptomycínu môžu použité antibiotiká zahŕňať aj gentamicín, kanamycín, polymyxín, tetracyklín, nystatín atď. Bežne používané sú 400 až 800 μg/ml kanamycínu alebo 200 μg/ml tetracyklínu.Médium sa mení každé 2 až 3 dni a odovzdáva sa 1 až 2 generáciám na ošetrenie.V posledných rokoch sa uvádza, že 4-fluór, 2-hydroxychinolín (Ciprofloxacín, Cip), derivát pleu-romutilínu (derivát pleu-romutilínu, BM-Cyclin2: BM-1 a derivát tetracyklínu (BM-2)) Antibiotiká sú účinný pri ničení mykoplazmy, ak sa používa samostatne alebo v kombinácii.Všetky tieto tri antibiotiká sa pripravia do 250x koncentrovaných roztokov v PBS a uchovávajú sa pri -20 °C na neskoršie použitie.Používaná koncentrácia Cip je 10 μg/ml, BM-1 je 10 μg/ml a BM-2 je 5 μg/ml.Pri použití najskôr odsajte kontaminované kultivačné médium, pridajte kultivačné médium RPMI1640 obsahujúce BM-1, potom po 3 dňoch odsajte kultivačné médium, pridajte kultivačné médium RPMI1640 obsahujúce BM-2 a kultivujte 4 dni a tak ďalej 3 po sebe nasledujúce dni. .kolách, kým sa pomocou 33258 fluorescenčnej farbiacej mikroskopie nepreukáže, že mykoplazma bola eliminovaná, potom sa pridá normálne kultivačné médium na kultiváciu a pasážovanie 3-4 krát.

2. Tepelná úprava

Inkubácia kontaminovanej tkanivovej kultúry pri 41 °C počas 18 hodín môže zabiť mykoplazmu, ale má nepriaznivé účinky na bunky.Preto by sa mal pred ošetrením vykonať predbežný test, aby sa preskúmal čas zahrievania, ktorý môže zabiť mykoplazmu v maximálnej miere a ktorý má najmenší vplyv na bunky.Táto metóda je niekedy nespoľahlivá.Ak sa najskôr ošetrí liekmi a potom sa zahreje na 41 ° C, účinok bude lepší.

3. Použite sérum špecifické pre mykoplazmy

Mykoplazmovú kontamináciu možno odstrániť 5 % králičím imúnnym sérom proti mykoplazme (hemaglutinačný titer 1:320 alebo vyšší).Pretože špecifická protilátka môže inhibovať rast mykoplazmy, zmení sa na negatívnu 11 dní po liečbe antisérom a zostane negatívna o 5 mesiacov neskôr.je negatívny.Tento spôsob je však problematickejší a nie je taký pohodlný a ekonomický ako používanie antibiotík.

4. Iné metódy

Okrem vyššie uvedených metód odstraňovania kontaminácie existujú aj metódy očkovania a sterilizácie u zvierat, metódy fagocytózy makrofágov, metódy pridávania bromuracilu do kontaminovanýchkultivačné fľašea potom ich ožarovanie svetlom a filtračné metódy atď., ale všetky sú viac problematické a neúčinné.Preto, keď už dôjde ku kontaminácii mykoplazmou, pokiaľ to nie je obzvlášť dôležité, vo všeobecnosti sa zlikviduje a znovu kultivuje.

kontaktujte prosím Whatsapp & Wechat: +86 180 8048 1709